Partículas Lentivirales de Activación (h) TARC: sc-401905-LAC

El CCL17 humano codifica la quimiocina regulada por el timo y la activación (TARC), una quimiocina CC secretada que señaliza principalmente a través de CCR4 para dirigir la quimiotaxis de células T polarizadas hacia Th2, células T reguladoras y otros subgrupos de leucocitos CCR4 positivos. La producción de TARC por células dendríticas, células endoteliales y células epiteliales conecta el reconocimiento innato con el tráfico adaptativo y contribuye al posicionamiento de leucocitos dentro de los tejidos inflamados. Este eje se cruza con programas inflamatorios impulsados por citocinas y regula el reclutamiento de células inmunitarias, su estado de activación y su residencia tisular. La expresión desregulada de CCL17/TARC se estudia con frecuencia en la inflamación alérgica, el asma, la dermatitis atópica y otras afecciones mediadas por el sistema inmunitario, en las que la migración dependiente de CCR4 alterada moldea la composición inmunitaria local.

Las partículas de activación lentiviral TARC (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de CCL17 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral TARC (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción CCL17, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de TARC. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo CCL17 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.