Plasmide Double Nickase (m) TAP1: sc-423265-NIC

Le gène murin *Tap1* code le transporteur associé au traitement de l’antigène 1 (TAP1), une sous-unité de la famille des transporteurs ABC (ATP-binding cassette) qui forme un hétérodimère avec TAP2 afin de transloquer, du cytosol vers le réticulum endoplasmique, des peptides issus du protéasome. Cet apport en peptides est indispensable au chargement des peptides sur les molécules du CMH de classe I et à la présentation antigénique subséquente aux lymphocytes T CD8+, reliant ainsi TAP1 aux voies centrales de la surveillance immunitaire adaptative. L’activité de TAP1 s’articule avec la signalisation inflammatoire induite par les interférons, le contrôle qualité du réticulum endoplasmique et l’axe immunoprotéasome–CMH I qui façonne l’immunopeptidome cellulaire. Des altérations de la fonction de TAP1 sont associées à une diminution de l’expression de surface du CMH I et à des phénotypes d’échappement immunitaire dans des modèles pertinents pour la maladie, ce qui étaye des études mécanistiques en immunologie, infection et biologie tumorale.

TAP1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Tap1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Tap1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Tap1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Tap1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.