TALL-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406502

Panoramica

TNFSF13B codifica TALL-1 (noto anche come BAFF), una citochina della superfamiglia del TNF essenziale per la sopravvivenza, la maturazione e la produzione di immunoglobuline da parte delle cellule B. TALL-1 segnala attraverso recettori tra cui BAFF-R, TACI e BCMA per attivare NF-κB e vie di sopravvivenza correlate, modellando l’omeostasi periferica delle cellule B e le risposte immunitarie umorali. Un’espressione o una segnalazione deregolata di TNFSF13B è associata a un’alterata tolleranza delle cellule B e a una persistenza anomala delle plasmacellule, collegando questo asse all’attivazione immunitaria associata all’autoimmunità e a stati infiammatori guidati dalle cellule B. In quanto ligando sia solubile sia associato alla membrana, TALL-1 influenza anche il crosstalk tra cellule immunitarie all’interno dei tessuti linfoidi e di microambienti infiammati.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TALL-1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TNFSF13B in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TNFSF13B insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TNFSF13B a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TALL-1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TNFSF13B per lo studio della segnalazione di TALL-1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni TNFSF13B critici per la funzione di TALL-1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TNFSF13B per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TALL-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal TALL-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TNFSF13B. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TALL-1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR TALL-1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TNFSF13B per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TNFSF13B definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.