Plásmido CRISPR de Activación (m) TAL1: sc-423261-ACT

El gen Tal1 de ratón (TAL1; proteína 1 de leucemia linfoblástica aguda de células T) codifica un factor de transcripción de tipo hélice–bucle–hélice básico que se une a motivos E-box y actúa en complejos multiproteicos con factores GATA, cofactores LMO y proteínas E para controlar la expresión génica específica de linaje. TAL1 es un regulador clave de la especificación hematopoyética y de la maduración eritroide, y configura programas de compromiso del destino celular, proliferación y diferenciación. Mediante el control transcripcional de redes hematopoyéticas, TAL1 integra señales del desarrollo y la regulación de la cromatina para mantener un desarrollo adecuado de las células sanguíneas. La actividad desregulada de TAL1 se asocia con hematopoyesis aberrante y se estudia ampliamente en modelos de circuitería transcripcional leucemogénica y de biología de células madre/progenitoras.

TAL1 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Tal1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TAL1 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Tal1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Tal1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TAL1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Tal1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TAL1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TAL1 en células tumorales con expresión de Tal1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.