Partículas Lentivirales de Activación (m2) Tak1: sc-424044-LAC-2

El gen murino Map3k7 codifica TAK1 (quinasa 1 activada por TGF-β), una MAP3K que integra señales de los receptores de TGF-β/BMP, miembros de la superfamilia del receptor de TNF, receptores tipo Toll y complejos del receptor de IL-1 para activar en sentido descendente las cascadas de NF-κB y MAPK (JNK, p38 y ERK). Mediante la fosforilación de las MAP2K y del complejo IKK a través de adaptadores TAB, TAK1 regula la señalización inflamatoria y de la inmunidad innata, las respuestas al estrés, las decisiones de apoptosis/supervivencia y la homeostasis tisular en múltiples tipos celulares. La señalización desregulada de TAK1 se asocia con una producción aberrante de citocinas, deterioro de la integridad de las barreras y remodelado patológico en modelos de enfermedad inflamatoria, autoinmunidad y redes de señalización vinculadas al cáncer. La edición genética dirigida a Map3k7 permite la disección mecanística de la señalización proximal al receptor, la intercomunicación entre vías y fenotipos específicos de tipo celular mediante estrategias de knockout/knockin, etiquetado con epítopos o perturbación del dominio quinasa en células murinas y en sistemas in vivo.

Las partículas de activación lentiviral Tak1 (m2) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Map3k7 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Tak1 (m2) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Map3k7, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Tak1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Map3k7 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.