Plásmido CRISPR de Activación (m) Tak1: sc-424044-ACT

Mouse Map3k7 codifica TAK1, una MAP3K de serina/treonina que integra la señalización aguas abajo de los receptores de TNF, IL‑1, ligandos de TLR y miembros de la familia TGF‑β para coordinar respuestas inflamatorias y de estrés. TAK1 fosforila MAP2K para activar las cascadas de JNK y p38 MAPK, y activa el complejo IKK para impulsar la transcripción dependiente de NF‑κB, modulando así la producción de citocinas, la apoptosis y las decisiones de supervivencia celular. A través de estas vías, TAK1 influye en la activación de la inmunidad innata, la homeostasis tisular y las respuestas celulares al estrés genotóxico y oxidativo. La desregulación de la señalización de TAK1 se ha implicado en patología inflamatoria, procesos relacionados con la fibrosis y redes de señalización oncogénica, lo que convierte a Map3k7 en un nodo ampliamente utilizado para estudios mecanísticos del “cross-talk” entre vías.

Tak1 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Map3k7 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Tak1 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Map3k7 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Map3k7, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Tak1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Map3k7 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Tak1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Tak1 en células tumorales con expresión de Map3k7 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.