Plásmido CRISPR de Activación (h) TAF I p63: sc-404427-ACT

TAF1B codifica TAF I p63, un componente central del complejo SL1 necesario para el inicio de la transcripción por la ARN polimerasa I en promotores de ADN ribosómico. Al sostener la síntesis de pre‑ARNr y la biogénesis ribosomal, TAF I p63 contribuye a la función nucleolar, al control del crecimiento celular y a la coordinación de la proteostasis con la demanda metabólica. La regulación de la transcripción de rDNA dependiente de TAF1B se entrecruza con vías sensibles al estrés que modulan la integridad nucleolar y la progresión del ciclo celular. La regulación alterada de la transcripción por Pol I y de la biogénesis ribosomal se ha asociado con estados proliferativos y fenotipos vinculados a ribosomopatías, lo que convierte a TAF1B en una diana útil para estudios mecanísticos de la biología del nucleolo y del control transcripcional.

TAF I p63 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TAF1B sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TAF I p63 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TAF1B en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TAF1B, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TAF I p63. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TAF1B y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TAF I p63 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TAF I p63 en células tumorales con expresión de TAF1B silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.