Plásmido CRISPR de Activación (h) Tachykinin: sc-400690-ACT

TAC1 codifica péptidos precursores de taquicininas que se procesan para generar ligandos neuroactivos como la sustancia P y la neuroquinina A, los cuales señalizan principalmente a través de receptores de neuroquinina para regular la neurotransmisión, la nocicepción, la inflamación neurogénica y el tono del músculo liso. La señalización por taquicininas activa vías de receptores acoplados a proteínas G, incluidas la fosfolipasa C/IP3 con flujo de Ca²⁺, la activación de PKC y las cascadas MAPK/ERK, lo que influye en la liberación de citocinas y la excitabilidad neuronal. En tejidos humanos, la expresión de TAC1 está enriquecida en neuronas sensoriales y en determinados contextos neuroendocrinos e inmunitarios, lo que la vincula con los circuitos inflamatorios y el diálogo cruzado neuroinmunitario. En la literatura, la desregulación de las vías de taquicininas se ha asociado con estados de dolor crónico, hiperreactividad de las vías respiratorias, trastornos de la motilidad gastrointestinal y procesos neuroinflamatorios, lo que respalda estudios mecanísticos sobre la modulación de esta vía.

Tachykinin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TAC1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Tachykinin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TAC1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TAC1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Tachykinin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TAC1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Tachykinin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Tachykinin en células tumorales con expresión de TAC1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.