Plásmido Doble Nickase (h) TACE/ADAM17: sc-400827-NIC

ADAM17, también conocida como TACE, es una metaloproteasa anclada a la membrana que cataliza el desprendimiento del ectodominio de diversas proteínas de la superficie celular, entre ellas TNF, ligandos de EGFR (p. ej., TGF-α y anfiregulina) y múltiples moléculas de adhesión y receptores. Mediante este procesamiento proteolítico, TACE/ADAM17 modula la señalización inflamatoria, la activación de la vía EGFR/MAPK y la comunicación célula–célula, influyendo en la proliferación, la supervivencia y el reclutamiento de células inmunitarias. La actividad de ADAM17 está estrictamente regulada por su maduración en la vía secretora y por su tráfico en la membrana plasmática, y participa en respuestas coordinadas a citocinas, estrés y factores de crecimiento. La liberación de ectodominios dependiente de ADAM17 cuando está desregulada se ha implicado en la inflamación crónica, la señalización asociada al cáncer, el remodelado cardiovascular y procesos neuroinflamatorios, lo que la convierte en un blanco frecuente en estudios mecanísticos sobre la disponibilidad de receptores/ligandos y la dinámica de las vías downstream.

TACE/ADAM17 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ADAM17 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ADAM17. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ADAM17. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ADAM17 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.