T2R14 Plasmide Double Nickase (h): sc-410582-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- T2R14 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il T2R14 Double Nickase Plasmid (h) e il T2R14 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira TAS2R14. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
T2R14 Plasmide Double Nickase (h) | sc-410582-NIC | 20 µg | $410.00 |
TAS2R14 codifica per il recettore umano del gusto amaro T2R14, un GPCR di classe A che rileva diversi composti amari e si accoppia a proteine G eterotrimeriche per regolare la segnalazione dei secondi messaggeri. L’attivazione del recettore coinvolge tipicamente vie dipendenti da PLCβ che aumentano il calcio intracellulare e modulano MAPK e altre reti di segnalazione a valle, influenzando secrezione, motilità e programmi di difesa innata nei tessuti extraorali. L’espressione di TAS2R14 è stata riportata anche al di fuori del sistema gustativo, includendo epiteli delle vie aeree e del tratto gastrointestinale, dove la segnalazione chemosensoriale può plasmare le risposte di barriera e infiammatorie. Alterazioni della segnalazione dei recettori dell’amaro sono state studiate nel contesto dell’iperreattività delle vie aeree, di condizioni infiammatorie croniche e di cambiamenti di segnalazione associati ai tumori, a supporto della sua rilevanza negli studi sui meccanismi di malattia.
T2R14 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus TAS2R14 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di TAS2R14. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di TAS2R14. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con TAS2R14 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.