Plasmide Double Nickase (h) T1R3: sc-401808-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) T1R3 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide T1R3 Double Nickase (h) et le plasmide T1R3 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant TAS1R3. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) T1R3 | sc-401808-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) T1R3 | sc-401808-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TAS1R3 code le récepteur du goût humain de type 1 membre 3 (T1R3), un RCPG de classe C qui forme un hétérodimère avec TAS1R1 ou TAS1R2 pour constituer des récepteurs détectant respectivement les nutriments umami et sucrés. Après liaison d’un ligand, les récepteurs contenant T1R3 se couplent à des protéines G et activent la signalisation PLCβ2–IP3, la mobilisation du Ca²⁺ intracellulaire, ainsi que des programmes en aval impliquant les MAPK et la sécrétion. Au-delà des bourgeons gustatifs oraux, l’expression de TAS1R3 dans les tissus gastro-intestinaux et métaboliques l’associe à la signalisation entéroendocrine et à une régulation, dépendante des nutriments, de la libération hormonale et de la fonction épithéliale. Des voies de détection du sucré/de l’umami impliquant T1R3, lorsqu’elles sont dérégulées, ont été étudiées dans des contextes tels que le dysfonctionnement métabolique, l’inflammation et l’altération de la signalisation chimiosensorielle dans des microenvironnements associés au cancer.
T1R3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TAS1R3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TAS1R3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TAS1R3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TAS1R3.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.