T1R3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401808

Descripción general

TAS1R3 codifica la subunidad del receptor del gusto humano T1R3, un GPCR de clase C que forma heterodímeros con T1R1 o T1R2 para detectar ligandos asociados al umami y al sabor dulce. Tras su activación, la señalización asociada a T1R3 involucra proteínas G heterotriméricas y la vía downstream PLCβ2–IP3–flujo de Ca²⁺, lo que desencadena respuestas efectoras capaces de influir en la secreción y la excitabilidad celular. Más allá de los tejidos gustativos, la expresión de TAS1R3 en epitelios extraorales y órganos metabólicos se ha utilizado para estudiar circuitos de detección de nutrientes que se cruzan con procesos endocrinos e inflamatorios. La desregulación de la señalización de los receptores de dulce/umami se ha investigado en estudios sobre homeostasis metabólica y defectos quimiosensoriales, lo que respalda su relevancia como herramienta molecular para investigaciones a nivel de vías.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO T1R3 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen TAS1R3 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del TAS1R3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de TAS1R3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína T1R3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en TAS1R3 para la investigación de la señalización de T1R3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de TAS1R3 críticos para la función de T1R3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de TAS1R3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido T1R3 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido T1R3 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus TAS1R3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR T1R3 (h) y el plásmido HDR T1R3 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología TAS1R3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana TAS1R3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.