Plásmido CRISPR de Activación (h) T-type Ca⁺⁺ CP α1H: sc-401147-ACT

CACNA1H codifica la subunidad α1H formadora del poro del canal de calcio dependiente de voltaje tipo T CaV3.2, que media una entrada de Ca2+ activada a bajos voltajes y contribuye a modelar la excitabilidad subumbral, la actividad de disparo en ráfagas rítmicas y la señalización intracelular dependiente de calcio. Al acoplar la despolarización de membrana con vías reguladas por Ca2+, CaV3.2 influye en la liberación de neurotransmisores, la secreción hormonal y programas de transcripción dependientes de calcio en tejidos excitables y no excitables. La expresión aberrante de CACNA1H o una actividad anómala del canal se han implicado en trastornos asociados a alteraciones de la señalización eléctrica y de la homeostasis del calcio, incluidos fenotipos del espectro epiléptico, sensibilización al dolor y alteraciones del ritmo cardíaco. Como nodo dentro de las redes de señalización del calcio, CACNA1H se estudia con frecuencia por su contribución a la excitabilidad, la regulación génica dependiente de Ca2+ y el acoplamiento estímulo–respuesta.

T-type Ca++ CP α1H El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CACNA1H sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

T-type Ca++ CP α1H El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CACNA1H en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CACNA1H, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de T-type Ca++ CP α1H. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CACNA1H y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de T-type Ca++ CP α1H en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía T-type Ca++ CP α1H en células tumorales con expresión de CACNA1H silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.