Particules Lentivirales d'Activation (h) T-type Ca⁺⁺ CP α1G: sc-418331-LAC

CACNA1G code pour le canal calcique humain de type T α1G (Cav3.1), un canal activé à bas seuil de tension qui permet un influx transitoire de Ca²⁺ à des potentiels de membrane proches du repos. En modulant l’excitabilité membranaire, les décharges en rebond (rebound bursting) et l’activité de décharge oscillatoire, Cav3.1 influence l’électrophysiologie neuronale et cardiaque et couple l’activité électrique à la signalisation dépendante du calcium, notamment les voies régulées par la calmoduline et les programmes transcriptionnels en aval. Une activité altérée de CACNA1G a été associée à des troubles impliquant une rythmicité et une excitabilité anormales, notamment une susceptibilité aux crises et des phénotypes de conduction cardiaque, et ce gène est fréquemment étudié dans des contextes de dérégulation de la signalisation calcique. En tant que canal ionique membranaire, CACNA1G constitue également un lien mécanistique entre l’entrée de Ca²⁺ dépendante des stimuli et des processus cellulaires tels que la libération de neurotransmetteurs, l’activité pacemaker et l’expression génique dépendante de l’activité.

Les particules d'activation lentivirales T-type Ca++ CP α1G (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de CACNA1G dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales T-type Ca++ CP α1G (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription CACNA1G, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de T-type Ca++ CP α1G. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif CACNA1G ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.