Plasmide CRISPR/Cas9 KO T-FABP (m): sc-423411

Présentation

Fabp9 code la protéine testiculaire de liaison aux acides gras (T-FABP), une protéine chaperonne des lipides impliquée dans le transport intracellulaire des acides gras à longue chaîne et d’autres ligands hydrophobes dans la lignée germinale mâle. En régulant la captation, la séquestration et l’acheminement des acides gras vers les enzymes métaboliques et les membranes, T-FABP est associée à des voies d’homéostasie lipidique qui influencent la β‑oxydation mitochondriale, le remodelage membranaire et l’équilibre rédox au cours de la spermatogenèse. Des altérations de l’activité de la famille des FABP sont largement liées à des dérégulations métaboliques et à la signalisation inflammatoire, et Fabp9 est couramment étudié dans le contexte du développement des spermatozoïdes, de leur motilité et de phénotypes liés à la fertilité. Dans des modèles murins, Fabp9 constitue un nœud expérimental pertinent pour analyser comment la gestion des lipides par les cellules germinales affecte la biologie de la reproduction et l’adaptation métabolique en réponse au stress.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO T-FABP (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Fabp9 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Fabp9, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Fabp9 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine T-FABP.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Fabp9 pour l'étude de la signalisation de T-FABP, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Fabp9 essentiels à la fonction de T-FABP
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Fabp9 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le T-FABP plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le T-FABP plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Fabp9. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le T-FABP plasmide HDR (m) et le T-FABP (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Fabp9 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Fabp9 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.