Plasmide CRISPR/Cas9 KO Tβ-4 (m): sc-422497
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Tβ-4 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique Tβ-4, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Tβ-4 Antibody (4H7): sc-293251
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO Tβ-4 (m) | sc-422497 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Tmsb4x code la thymosine β-4 (Tβ-4), un peptide séquestreur d’actine hautement conservé qui régule la disponibilité de la G-actine et favorise le remodelage dynamique du cytosquelette. Dans les cellules de souris, Tβ-4 influence des processus tels que la migration cellulaire, l’adhésion, la motilité associée aux plaies et l’organisation du cytosquelette, via la modulation de la polymérisation de l’actine et de signalisations en aval liées aux adhérences focales et aux voies des GTPases de la famille Rho. En façonnant le trafic dépendant de l’actine et les réponses cellulaires au stress, Tmsb4x a été étudié dans des contextes tels que l’inflammation, le remodelage tissulaire, les programmes angiogéniques et la progression fibrotique. Des dynamiques d’actine dérégulées, associées à une activité altérée de Tβ-4, peuvent affecter des phénotypes prolifératifs et migratoires pertinents pour la biologie du cancer et la fonction des cellules immunitaires.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Tβ-4 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Tmsb4x dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Tmsb4x, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Tmsb4x à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Tβ-4.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Tmsb4x pour l'étude de la signalisation de Tβ-4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Tmsb4x essentiels à la fonction de Tβ-4
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Tmsb4x pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le Tβ-4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Tβ-4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Tmsb4x. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le Tβ-4 plasmide HDR (m) et le Tβ-4 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Tmsb4x pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Tmsb4x définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.