Plásmido CRISPR de Activación (h) Tβ-4: sc-417057-ACT

La timosina beta-4, codificada por el gen humano TMSB4X, es un péptido altamente conservado que secuestra actina y regula la disponibilidad de actina G, además de favorecer la remodelación del citoesqueleto, la motilidad celular y los cambios en la forma celular en respuesta al estrés. Al modular la dinámica de la actina, influye en procesos como la migración, la adhesión y las respuestas celulares asociadas a la cicatrización, y se ha vinculado con vías que controlan la inflamación y la remodelación tisular. Se han descrito alteraciones en la expresión de TMSB4X en distintos contextos, como la progresión tumoral, la señalización angiogénica y estados fibróticos o inflamatorios, lo que lo convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos de fenotipos dependientes del citoesqueleto. Como regulador citoesquelético de amplia expresión, TMSB4X ofrece un objetivo accesible para investigar cómo la homeostasis de la actina se integra con programas transcripcionales y señales del microambiente celular.

Tβ-4 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TMSB4X sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Tβ-4 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TMSB4X en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TMSB4X, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Tβ-4. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TMSB4X y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Tβ-4 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Tβ-4 en células tumorales con expresión de TMSB4X silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.