Plásmido CRISPR de Activación (h) Syntaxin 8: sc-405269-ACT

STX8 codifica la sintaxina 8, una proteína Q-SNARE que coordina el acoplamiento de vesículas y la fusión de membranas dentro del sistema endosomal. La sintaxina 8 participa en el tráfico de endosomas hacia la red trans-Golgi y en el tráfico endolisosomal mediante el ensamblaje de complejos SNARE, modulando el reciclaje de receptores, la clasificación de carga y la degradación dirigida a lisosomas. Al regular la distribución y el recambio de receptores de señalización y transportadores, STX8 influye en la homeostasis celular, la señalización inmunitaria y las respuestas al estrés vinculadas al transporte vesicular. La desregulación del tráfico endosomal y de la función SNARE se implica con frecuencia en la neurodegeneración, la adaptación de células cancerosas y la biología de las enfermedades infecciosas, lo que convierte a STX8 en un nodo útil para estudios orientados a rutas sobre la dinámica de membranas.

Syntaxin 8 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de STX8 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Syntaxin 8 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus STX8 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional STX8, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Syntaxin 8. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo STX8 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Syntaxin 8 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Syntaxin 8 en células tumorales con expresión de STX8 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.