Syntaxin 10 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406240

Übersicht

STX10 kodiert Syntaxin 10, ein t-SNARE-Protein, das hauptsächlich im trans-Golgi-Netzwerk und an endosomalen Membranen lokalisiert ist, wo es das Andocken von Vesikeln und die Membranfusion reguliert. Durch Interaktionen mit anderen SNARE-Komponenten und Tethering-Faktoren trägt Syntaxin 10 zur Kontrolle des endosom-zu-Golgi-Retrievals und des post-Golgi-Transports bei und unterstützt damit Rezeptorrecycling, lysosomenbezogene Transportprozesse sowie die Homöostase des sekretorischen Gesamtwegs. Eine Störung des STX10-abhängigen Transports kann die Sortierung von Frachtproteinen und die Dynamik von Organellen verändern – Prozesse, die häufig mit Immun-Signalgebung, Neurobiologie und zellulären Stressantworten in Verbindung stehen. Veränderte vesikuläre Transportprogramme unter Beteiligung der SNARE-Maschinerie wurden in Modellsystemen mit krankheitsrelevanten Phänotypen assoziiert, darunter fehlregulierte Entzündungsreaktionen und neuroentwicklungsbezogene Funktionsstörungen.

Das Syntaxin 10 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des STX10-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des STX10-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von STX10 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Syntaxin 10-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von STX10-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Syntaxin 10-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf STX10-Exone abzielen, die für die Syntaxin 10-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere STX10-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Syntaxin 10 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Syntaxin 10 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des STX10-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Syntaxin 10 HDR-Plasmid (h) und Syntaxin 10 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von STX10-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten STX10-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.