Synoviolin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403476

Descripción general

El gen humano **SYVN1** codifica la sinoviolina, una ligasa E3 de ubiquitina de tipo RING residente en el retículo endoplásmico (RE) que actúa como componente central de la degradación asociada al RE (ERAD), ubiquitinando proteínas mal plegadas y promoviendo su eliminación por el proteasoma. Mediante el control de calidad de proteínas del RE, la sinoviolina ayuda a mantener la proteostasis y modula la señalización de la respuesta a proteínas mal plegadas (UPR), vinculando el estrés del RE con vías inflamatorias y de supervivencia aguas abajo. La actividad de **SYVN1** se ha relacionado con la regulación de la apoptosis y el control del ciclo celular a través del recambio dependiente de ubiquitina de sustratos clave, lo que influye en la adaptación celular al estrés crónico. La expresión desregulada de **SYVN1** o una capacidad alterada de ERAD se asocian con mecanismos relevantes para la enfermedad, incluida la hiperplasia sinovial y la patología articular inflamatoria, así como con contextos más amplios de desequilibrio de la proteostasis.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Synoviolin (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen SYVN1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del SYVN1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de SYVN1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Synoviolin.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en SYVN1 para la investigación de la señalización de Synoviolin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de SYVN1 críticos para la función de Synoviolin
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de SYVN1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Synoviolin CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Synoviolin CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus SYVN1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Synoviolin (h) y el plásmido HDR Synoviolin (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología SYVN1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana SYVN1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.