Synip Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423213

Descripción general

Stxbp4 codifica la proteína 4 de unión a sinaptotagmina (Synip), una proteína que interactúa con la sintaxina y participa en el tráfico vesicular regulado y la fusión de membranas. Synip se ha relacionado con la translocación de vesículas de GLUT4 estimulada por insulina, favoreciendo la captación de glucosa al coordinar eventos de acoplamiento y fusión dependientes de SNARE en la membrana plasmática. A través de sus interacciones con la maquinaria exocítica central, Synip contribuye a la secreción acoplada a estímulos y a la dinámica de endomembranas que se cruza con vías de señalización metabólica. Las alteraciones en la función de Synip se han asociado con una respuesta a la insulina deteriorada y con defectos más amplios en procesos de transporte vesicular relevantes para la investigación de enfermedades metabólicas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Synip (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Stxbp4 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Stxbp4 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Stxbp4 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Synip.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Stxbp4 para la investigación de la señalización de Synip, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Stxbp4 críticos para la función de Synip
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Stxbp4 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Synip CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Synip CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Stxbp4. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Synip (m) y el plásmido HDR Synip (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Stxbp4 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Stxbp4 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.