Plásmido CRISPR de Activación (h) SYND4/SDC4/Syndecan-4: sc-400502-ACT

SDC4 codifica la sindecán-4 (SYND4), un proteoglicano transmembrana de heparán sulfato que funciona como correceptor de proteínas de la matriz extracelular, quimiocinas y factores de crecimiento para coordinar la señalización célula–matriz. Mediante interacciones con integrinas y adaptadores del citoesqueleto, SYND4 regula el ensamblaje de adhesiones focales, la señalización de PKCα/GTPasas de la familia Rho y vías posteriores que controlan la migración, la mecanotransducción y la remodelación asociada a la cicatrización. La alteración de la expresión y el desprendimiento (shedding) de SDC4 se ha vinculado con la señalización inflamatoria, la disfunción vascular y procesos relacionados con la fibrosis, y se estudia con frecuencia en contextos como las interacciones tumor–estroma y el comportamiento celular invasivo. Como organizador en la superficie celular de la presentación de ligandos y de la dinámica de adhesión, SYND4 se utiliza ampliamente como un nodo para investigar redes de señalización extracelular y fenotipos que incluyen motilidad, integridad de barrera y remodelación de la matriz.

SYND4/SDC4/Syndecan-4 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SDC4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SYND4/SDC4/Syndecan-4 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SDC4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SDC4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SYND4/SDC4/Syndecan-4. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SDC4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SYND4/SDC4/Syndecan-4 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SYND4/SDC4/Syndecan-4 en células tumorales con expresión de SDC4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.