Plásmido CRISPR de Activación (h) Synaptotagmin IV: sc-403314-ACT

SYT4 codifica la sinaptotagmina IV, una proteína de dominio C2 asociada a membrana que se localiza en vesículas secretoras y modula la exocitosis dependiente de Ca²⁺ en neuronas y otras células excitables. A diferencia de las sinaptotagminas canónicas que actúan como sensores rápidos de Ca²⁺, la sinaptotagmina IV suele vincularse con el ajuste dependiente de la actividad de la probabilidad de fusión vesicular, la plasticidad sináptica y la liberación regulada de neuropéptidos y neurotransmisores. La función de SYT4 se entrecruza con la fusión de membranas mediada por SNARE, el tráfico vesicular y las vías de acoplamiento estímulo-secreción que influyen en la adaptación de las redes neuronales. La expresión o regulación alteradas de la maquinaria de liberación vesicular, incluida SYT4, se han asociado con fenotipos del neurodesarrollo y neuropsiquiátricos, y se estudian en el contexto de la disfunción sináptica.

Synaptotagmin IV El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SYT4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Synaptotagmin IV El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SYT4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SYT4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Synaptotagmin IV. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SYT4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Synaptotagmin IV en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Synaptotagmin IV en células tumorales con expresión de SYT4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.