Synaptotagmin III Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423245
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- Synaptotagmin III El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico Synaptotagmin III, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Synaptotagmin III Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-423245 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
El gen Syt3 de ratón codifica la sinaptotagmina III, una proteína de dominio C2 anclada a la membrana que actúa como sensor de Ca2+, acoplando la entrada de calcio al tráfico vesicular regulado y a la fusión de membranas. La sinaptotagmina III contribuye a la exocitosis de vesículas sinápticas y al reciclaje endocítico, ayudando a modular la cinética de liberación de neurotransmisores y la plasticidad sináptica a corto plazo. Mediante interacciones dependientes de Ca2+ con fosfolípidos y con la maquinaria asociada a SNARE, influye en vías de tráfico dependientes de la actividad en neuronas y en otros tipos celulares secretores. La alteración de la señalización de la familia de sinaptotagminas se ha vinculado a mecanismos relevantes para fenotipos del neurodesarrollo y neurodegenerativos, lo que respalda a Syt3 como una diana para investigar la disfunción sináptica.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO Synaptotagmin III (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Syt3 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Syt3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Syt3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Synaptotagmin III.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Syt3 para la investigación de la señalización de Synaptotagmin III, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Syt3 críticos para la función de Synaptotagmin III
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Syt3 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido Synaptotagmin III CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Synaptotagmin III CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Syt3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Synaptotagmin III (m) y el plásmido HDR Synaptotagmin III (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Syt3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Syt3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.