Synaptotagmin II Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423244

Descripción general

Syt2 codifica la sinaptotagmina II, una proteína de membrana que se une a Ca2+ y actúa como un sensor rápido clave de Ca2+ para la exocitosis de vesículas sinápticas y la liberación sincrónica de neurotransmisores. A través de sus dominios C2, la sinaptotagmina II acopla la entrada de Ca2+ evocada por el potencial de acción con la fusión de membranas dependiente de SNARE, modulando la probabilidad de liberación presináptica y la plasticidad a corto plazo. En neuronas y uniones neuromusculares de ratón, la expresión de Syt2 está estrechamente vinculada a la transmisión rápida en circuitos definidos y vías motoras. La desregulación de la fusión vesicular desencadenada por Ca2+ y de los mecanismos de liberación presináptica es ampliamente relevante para estudios de neurofisiología y de mecanismos de enfermedades neurológicas en los que la disfunción sináptica es una característica central.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Synaptotagmin II (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Syt2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Syt2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Syt2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Synaptotagmin II.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Syt2 para la investigación de la señalización de Synaptotagmin II, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Syt2 críticos para la función de Synaptotagmin II
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Syt2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Synaptotagmin II CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Synaptotagmin II CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Syt2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Synaptotagmin II (m) y el plásmido HDR Synaptotagmin II (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Syt2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Syt2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.