Plasmide Double Nickase (h) Synapsin IIa: sc-404715-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Synapsin IIa correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Synapsin IIa Double Nickase (h) et le plasmide Synapsin IIa Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant SYN2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Synapsin IIa Antibody (1): sc-136086
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Synapsin IIa | sc-404715-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Synapsin IIa | sc-404715-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SYN2 code la synapsine IIa, une phosphoprotéine enrichie dans les neurones qui s’associe aux vésicules synaptiques et au cytosquelette d’actine afin de réguler le trafic vésiculaire, le maintien du pool de réserve et la libération de neurotransmetteurs dépendante de l’activité. La fonction de la synapsine IIa est contrôlée par phosphorylation en aval de cascades de signalisation neuronale, notamment les voies AMPc/PKA, les kinases dépendantes du Ca²⁺/calmoduline et la voie MAPK, reliant ainsi l’activité synaptique à la mobilisation des vésicules. Par ses rôles dans la synaptogenèse et la plasticité présynaptique, une expression ou une régulation altérée de SYN2 a été associée à une perturbation de l’excitabilité des réseaux et à des phénotypes neurodéveloppementaux et neuropsychiatriques, notamment une susceptibilité aux crises.
Synapsin IIa Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus SYN2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de SYN2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de SYN2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de SYN2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.