Plasmide CRISPR d'Activation (h) Synapsin Ia/b: sc-401064-ACT

SYN1 code la synapsine Ia/b, une phosphoprotéine enrichie dans les neurones qui s’associe aux vésicules synaptiques et aux filaments d’actine pour réguler l’agrégation des vésicules, le maintien du pool de réserve et la libération de neurotransmetteurs dépendante de l’activité. La fonction de la synapsine Ia/b est contrôlée par phosphorylation en aval de la signalisation dépendante du Ca2+ ainsi que des voies cAMP/PKA et MAPK, reliant l’activité neuronale à la mobilisation des vésicules présynaptiques et à la plasticité synaptique. En raison de son rôle dans la modulation de l’efficacité présynaptique et de l’excitabilité des réseaux, une régulation altérée de SYN1 a été associée à des phénotypes neurodéveloppementaux et neuropsychiatriques, notamment l’épilepsie et les troubles du spectre de l’autisme, et elle est fréquemment étudiée dans des modèles de dysfonction synaptique.

Synapsin Ia/b Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SYN1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Synapsin Ia/b Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SYN1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SYN1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Synapsin Ia/b. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SYN1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Synapsin Ia/b au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Synapsin Ia/b dans les cellules tumorales présentant une expression de SYN1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.