Syk Double Nickase Plasmid (h): sc-400189-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Syk Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Syk Double-Nickase-Plasmid (h) und Syk Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf SYK abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Syk: sc-1240
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Syk Double Nickase Plasmid (h) | sc-400189-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Syk Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400189-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SYK kodiert Syk, eine zytosolische, nichtrezeptorische Tyrosinkinase, die in hämatopoetischen Zellen die Signalübertragung von Immunrezeptoren an nachgeschaltete Effektorwege koppelt. Nach Aktivierung von ITAM-haltigen Rezeptoren wie dem B‑Zell‑Rezeptor und Fc‑Rezeptoren phosphoryliert Syk Adapterproteine und Enzyme, um die Signalweiterleitung über PLCγ, PI3K–AKT, MAPK/ERK und NF‑κB voranzutreiben. Dadurch werden Calciumflüsse, Transkriptionsprogramme, Proliferation und Zytokinantworten gesteuert. Über die reine Immunaktivierung hinaus trägt Syk zur FcR‑vermittelten Phagozytose, zu inflammasomassoziierten Signalkontexten sowie zum zytoskeletalen Remodeling über integrinverknüpfte Signalwege bei. Eine fehlregulierte SYK‑Signalgebung wurde mit aberranter B‑Zell‑Aktivierung und entzündlichen Regelkreisen in Verbindung gebracht, weshalb SYK häufig im Fokus von Studien zu Immun-Signalnetzwerken und Mechanismen hämatologischer Erkrankungen steht.
Syk Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des SYK-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von SYK abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die SYK-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit SYK-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.