Plásmido Doble Nickase (h2) SWAP-70: sc-403465-NIC-2
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h2)SWAP-70 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa SWAP-70 (h2) y el plásmido de doble nickasa SWAP-70 (h22) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a SWAP70. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: SWAP-70 Anticuerpo (F-3): sc-390431
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h2) SWAP-70 | sc-403465-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen humano SWAP70 codifica SWAP-70, un adaptador de señalización que se une a fosfatidilinositol, es reclutado a membranas activadas aguas abajo de PI3K y favorece la remodelación del citoesqueleto de actina dependiente de las GTPasas de la familia Rho. SWAP-70 contribuye a la activación, la adhesión y la migración de células inmunitarias al coordinar la dinámica del citoesqueleto y la señalización impulsada por receptores en procesos como las respuestas de los linfocitos B, el tráfico dependiente de antígeno y las funciones fagocíticas. La desregulación de vías asociadas a SWAP70 se ha investigado en el contexto de la disfunción inmunitaria y de la motilidad/invasión de células tumorales, donde la remodelación alterada de actina puede influir en el comportamiento celular. Los modelos de perturbación de SWAP70 permiten estudios mecanísticos de la señalización PI3K–Rac/Rho, el tráfico de membrana y los fenotipos controlados por el citoesqueleto mediante edición génica, para analizar efectos sobre la migración, la morfología y las salidas de señalización dependientes de estímulos.
SWAP-70 El plásmido de doble nicasa (h2) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus SWAP70 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de SWAP70. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de SWAP70. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con SWAP70 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.