SVEP1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-413315-ACT

SVEP1 (Sushi-, von-Willebrand-Faktor-Typ-A-, EGF- und Pentraxin-Domänen-enthaltend 1) kodiert ein großes, mit der extrazellulären Matrix assoziiertes Glykoprotein, das Zell-Zell- und Zell-Matrix-Interaktionen unterstützt. Es ist an Adhäsions- und morphogenetischen Prozessen beteiligt, indem es integrinabhängige Signalwege, die Organisation der extrazellulären Matrix und Programme der Gewebeumgestaltung moduliert, die den endothel-stromalen Crosstalk beeinflussen. SVEP1 wurde in Kontexten der Entwicklungs- und Gefäßbiologie beschrieben, und eine veränderte Expression wurde mit entzündlichem Remodeling und einer erhöhten Anfälligkeit für kardiometabolische Erkrankungen in Verbindung gebracht. Diese Eigenschaften machen SVEP1 zu einem nützlichen Ziel für die Untersuchung von Signalnetzwerken der extrazellulären Matrix, Zellmigration und der mikroenvironmentabhängigen Regulation der Genexpression.

SVEP1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SVEP1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

SVEP1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SVEP1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SVEP1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen SVEP1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SVEP1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von SVEP1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des SVEP1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SVEP1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.