SVCT2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401350

Descripción general

SLC23A2 codifica el transportador de vitamina C dependiente de sodio SVCT2, un transportador de membrana de alta afinidad que media la captación celular de ascorbato para mantener el equilibrio redox intracelular. Al apoyar a las dioxigenasas dependientes de ascorbato, SVCT2 influye en la maduración del colágeno, en la regulación epigenética a través de las enzimas TET/JmjC y en la señalización de hipoxia mediante hidroxilasas de prolina, afectando así la homeostasis de la matriz extracelular y los programas transcripcionales. La actividad de SVCT2 también se ha vinculado con la función mitocondrial y las respuestas al estrés oxidativo en tejidos metabólicamente activos. La alteración de la expresión de SLC23A2 o del manejo del ascorbato se ha asociado con susceptibilidad al daño oxidativo y con fenotipos relevantes para la neurobiología, la biología cardiovascular y el metabolismo de células cancerosas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO SVCT2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen SLC23A2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del SLC23A2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de SLC23A2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína SVCT2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en SLC23A2 para la investigación de la señalización de SVCT2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de SLC23A2 críticos para la función de SVCT2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de SLC23A2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido SVCT2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido SVCT2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus SLC23A2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR SVCT2 (h) y el plásmido HDR SVCT2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología SLC23A2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana SLC23A2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.