Sva CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423225

Übersicht

Sva (steroidogenic factor 1–associated) ist ein nukleäres Protein, das an der Regulation der Expression steroidogener Gene beteiligt ist, indem es mit Transkriptionsprogrammen interagiert, die die endokrine Entwicklung und die Hormonsynthese steuern. In Mauszellen wird Sva mit der Modulation der nukleären rezeptorabhängigen Transkription in Verbindung gebracht und beeinflusst Signalwege, die den Chromatinkontext mit gewebespezifischer Genregulation verknüpfen. Eine veränderte Kontrolle steroidogener Transkriptionsnetzwerke kann die Differenzierung von Gonaden und Nebennieren sowie die nachgeschaltete endokrine Homöostase beeinflussen, wodurch Sva zu einem relevanten Ziel für mechanistische Studien zu Entwicklungs- und Stoffwechselphänotypen wird. Untersuchungen von Sva mittels Loss- oder Gain-of-Function-Ansätzen unterstützen die Aufschlüsselung der Transkriptionsschaltkreise, die zelluläre Differenzierungszustände mit hormonresponsiver Signalübertragung koppeln.

Das Sva CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Sva-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Sva-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Sva nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Sva-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Sva-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Sva-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Sva-Exone abzielen, die für die Sva-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Sva-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Sva CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Sva CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Sva-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Sva HDR-Plasmid (m) und Sva HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Sva-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Sva-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.