Plasmide CRISPR d'Activation (m) SV2A: sc-425665-ACT

Le gène murin **Sv2a** code la glycoprotéine 2A des vésicules synaptiques (SV2A), un composant membranaire intégral des vésicules présynaptiques qui régule l’amorçage des vésicules et la probabilité de libération des neurotransmetteurs. SV2A participe à la transmission synaptique dépendante de l’activité en influençant le cycle des vésicules et l’exocytose couplée au calcium, favorisant un trafic et un recyclage efficaces des vésicules synaptiques. Une expression ou une fonction altérée de SV2A est associée à une perturbation de l’excitabilité des réseaux neuronaux et a été utilisée comme marqueur moléculaire dans des études sur l’épilepsie, des phénotypes neurodéveloppementaux et, plus largement, des dysfonctionnements synaptiques pertinents pour les mécanismes des maladies neurologiques.

SV2A Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Sv2a sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SV2A Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Sv2a dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Sv2a, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SV2A. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Sv2a natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SV2A au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SV2A dans les cellules tumorales présentant une expression de Sv2a silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.