Plasmide CRISPR d'Activation (h) survivin: sc-400205-ACT

BIRC5 code la survivine, une protéine multifonctionnelle inhibitrice de l’apoptose qui constitue également un composant central du complexe des passagers chromosomiques, coordonnant la progression mitotique, la ségrégation des chromosomes et la cytokinèse. La survivine intègre des signaux qui régissent le contrôle des points de contrôle du cycle cellulaire et la survie cellulaire en modulant l’activité des caspases et la dynamique du fuseau mitotique. Une expression dérégulée de BIRC5 est fréquemment associée à une prolifération accrue et à une résistance à l’apoptose, ce qui en fait un marqueur moléculaire largement utilisé dans les études portant sur la signalisation oncogénique, la stabilité du génome et les voies de réponse au stress. En tant que gène humain fortement dépendant du cycle cellulaire, BIRC5 constitue un nœud expérimentalement accessible pour étudier les programmes transcriptionnels liés à la mitose et les réseaux de protéostasie dans divers modèles cellulaires.

survivin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de BIRC5 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

survivin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus BIRC5 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription BIRC5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de survivin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus BIRC5 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de survivin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie survivin dans les cellules tumorales présentant une expression de BIRC5 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.