survivin CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400205-ACT

BIRC5 kodiert Survivin, ein multifunktionales Protein aus der Familie der Inhibitoren der Apoptose (IAP), das zugleich als zentraler Bestandteil des Chromosomal-Passenger-Komplexes dient, um den mitotischen Ablauf, die Chromosomentrennung und die Zytokinese zu koordinieren. Survivin integriert Signale, die die Kontrolle von Zellzyklus-Checkpoints und das Zellüberleben steuern, indem es die Caspase-Aktivität und die Dynamik der mitotischen Spindel moduliert. Eine fehlregulierte BIRC5-Expression ist häufig mit erhöhter Proliferation und Apoptoseresistenz assoziiert, weshalb BIRC5 in Studien zu onkogenen Signalwegen, Genomstabilität und Stressantwort-Pfaden breit als molekularer Marker eingesetzt wird. Als menschliches Gen mit ausgeprägter Zellzyklusabhängigkeit stellt BIRC5 zudem einen gut untersuchbaren Angriffspunkt dar, um mitosegekoppelte Transkriptionsprogramme und Proteostase-Netzwerke in unterschiedlichen zellulären Modellen zu analysieren.

survivin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen BIRC5-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

survivin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des BIRC5-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der BIRC5-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen survivin-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native BIRC5-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von survivin-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des survivin-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem BIRC5-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.