Plásmido CRISPR de Activación (h) SURF-4: sc-407135-ACT

El gen humano SURF4 codifica SURF-4, una proteína de membrana multipaso del retículo endoplásmico (RE) implicada en la organización temprana de la vía secretora y en el manejo de la carga entre el RE y el aparato de Golgi. SURF-4 se ha vinculado con procesos de exportación desde el RE y de control de calidad que moldean la proteostasis, influyendo en el tráfico intracelular y en la disponibilidad de proteínas secretadas y de membrana. A través de su función en la interfaz del RE, SURF-4 se cruza con vías que regulan el transporte mediado por vesículas, la señalización de estrés del RE y la homeostasis del plegamiento proteico. La alteración de la regulación del tráfico secretor y de la proteostasis del RE es relevante para diversas enfermedades, incluidos contextos en los que la secreción, la presentación de receptores o la remodelación adaptativa al estrés contribuyen a la disfunción celular.

SURF-4 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SURF4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SURF-4 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SURF4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SURF4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SURF-4. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SURF4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SURF-4 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SURF-4 en células tumorales con expresión de SURF4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.