SUR-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423218

Übersicht

Abcc9 kodiert den Sulfonylharnstoffrezeptor 2 (SUR-2), eine regulatorische Untereinheit der ATP-sensitiven Kaliumkanäle (KATP), die den zellulären Stoffwechselstatus mit der Membranerregbarkeit koppelt, indem sie das Gating der Kir6.x-Kanäle steuert. In der Maus sind SUR-2-haltige KATP-Kanäle vor allem in Herz- und vaskulärer glatter Muskulatur ausgeprägt, wo sie als Reaktion auf Veränderungen in ATP/ADP- sowie Phospholipid-Signalen die Dauer des Aktionspotenzials, die Calciumhandhabung und den Gefäßtonus mitbestimmen. Über diese Funktionen integriert ABCC9 bioenergetische Signale mit stressadaptiven Signalwegen wie der ischämischen Präkonditionierung, Programmen der Kontraktilität glatter Muskulatur und der mitochondrialen Funktion. Eine Fehlregulation der ABCC9/KATP-Kanalaktivität wurde mit kardiovaskulären und metabolischen Phänotypen in Verbindung gebracht, und humane ABCC9-Varianten sind mit Kanalopathie-Syndromen assoziiert, die Herz und Gefäße betreffen – damit ist Abcc9 ein relevantes Ziel für mechanistische Krankheitsmodelle.

Das SUR-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Abcc9-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Abcc9-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Abcc9 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SUR-2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Abcc9-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SUR-2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Abcc9-Exone abzielen, die für die SUR-2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Abcc9-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom SUR-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom SUR-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Abcc9-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SUR-2 HDR-Plasmid (m) und SUR-2 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Abcc9-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Abcc9-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.