SUR-2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401399-ACT

ABCC9 kodiert den Sulfonylharnstoffrezeptor 2 (SUR-2), eine regulatorische Untereinheit ATP-sensitiver Kaliumkanäle (KATP), die den zellulären Energiestatus mit der Erregbarkeit der Membran koppelt. Durch die Assemblierung mit Inward-Rectifier-Kaliumkanal‑Untereinheiten zu funktionellen KATP-Komplexen trägt SUR-2 dazu bei, die Kaliumleitfähigkeit als Reaktion auf Nukleotide und pharmakologische Liganden fein abzustimmen, und beeinflusst so den Tonus der glatten Gefäßmuskulatur und die elektrische Aktivität des Herzens. Diese Signalachse integriert metabolische Sensorik mit Ionenhomöostase und Stressantwort und wirkt auf Prozesse wie Vasodilatation, Aktionspotenzialdynamik und Schutz bei energetischer Belastung. Genetische Varianten oder eine Fehlregulation von ABCC9 wurden mit kardiovaskulären und systemischen Phänotypen in Verbindung gebracht, die Erregbarkeit und Gewebeperfusion betreffen, was die Relevanz des Gens für mechanistische Studien zur Kanalregulation und zur kardiometabolischen Biologie unterstreicht.

SUR-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ABCC9-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

SUR-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ABCC9-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ABCC9-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen SUR-2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ABCC9-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von SUR-2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des SUR-2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ABCC9-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.