Plásmido CRISPR de Activación (m) SULT2B1: sc-424817-ACT

El gen murino **Sult2b1** codifica la sulfotransferasa citosólica **SULT2B1**, una enzima que cataliza la sulfatación de esteroles —como el colesterol y los oxiesteroles— dependiente de **3′-fosfoadenosina-5′-fosfosulfato (PAPS)**. Al regular el equilibrio entre los reservorios de esteroles activos y sulfatados, SULT2B1 influye en el metabolismo de esteroides/esteroles, la homeostasis lipídica y nodos de señalización acoplados a vías de receptores nucleares, incluido **LXR** y programas transcripcionales relacionados. La actividad de Sult2b1 se ha vinculado con la biología de los lípidos de barrera en tejidos epiteliales y con procesos inmunometabólicos que modulan la señalización inflamatoria y la diferenciación celular. Las alteraciones en la dinámica de sulfatación de esteroles son relevantes para estudios sobre disfunción metabólica, mecanismos relacionados con la aterosclerosis y remodelado tisular, sin implicar resultados clínicos.

SULT2B1 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Sult2b1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SULT2B1 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Sult2b1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Sult2b1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SULT2B1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Sult2b1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SULT2B1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SULT2B1 en células tumorales con expresión de Sult2b1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.