Sulfiredoxin CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403023-ACT

SRXN1 kodiert Sulfiredoxin, eine ATP‑abhängige Oxidoreduktase, die hyperoxidierte Peroxiredoxine (Prx‑SO2H) in ihre aktive Thiolform zurückführt und so die Peroxidaseaktivität unter oxidativem Stress aufrechterhält. Durch die Aufrechterhaltung des Peroxiredoxin‑Zyklus unterstützt Sulfiredoxin die Redoxhomöostase und beeinflusst ROS‑sensitive Signalwege, darunter Nrf2/ARE‑vermittelte antioxidative Antworten sowie die nachgeschaltete Modulation der MAPK‑ und NF‑κB‑Signalgebung. Die SRXN1‑Aktivität steht mit der zellulären Anpassung an Hypoxie, Entzündung und proteotoxischen Stress in Zusammenhang; zudem wurde eine veränderte Expression in verschiedenen Kontexten der Krebsbiologie, Neurodegeneration und metabolischen Dysfunktion beschrieben, in denen ein Redoxungleichgewicht ein zentrales Merkmal ist. Diese Eigenschaften machen SRXN1 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung der Thiol‑Redoxregulation, der Reparatur oxidativer Schäden und stressinduzierter Transkriptionsprogramme in menschlichen Zellen.

Sulfiredoxin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SRXN1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Sulfiredoxin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SRXN1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SRXN1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Sulfiredoxin-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SRXN1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Sulfiredoxin-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Sulfiredoxin-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SRXN1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.