Plasmide CRISPR/Cas9 KO Sulf-2 (h): sc-403277

Présentation

SULF2 code pour Sulf-2, une endosulfatase extracellulaire qui élimine de manière sélective les groupements sulfate en position 6‑O des protéoglycanes à héparane sulfate, remodelant ainsi le « code de sulfation » qui contrôle la disponibilité des ligands et l’engagement des récepteurs. En modifiant l’héparane sulfate à la surface cellulaire et dans la matrice péricellulaire, Sulf-2 module les sorties de signalisation de voies telles que FGF, WNT et VEGF, influençant la prolifération, la migration, la différenciation et l’adhésion cellulaires. Des altérations de l’expression de SULF2 et le remodelage de l’héparane sulfate ont été associés à la régulation du microenvironnement tumoral, au comportement invasif et aux réponses angiogéniques, et sont également pertinents dans des processus fibrotiques et inflammatoires. Ces fonctions font de SULF2 une cible utile pour disséquer la signalisation dépendante de la matrice extracellulaire et la régulation de la communication cellulaire médiée par les glycosaminoglycanes.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Sulf-2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SULF2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SULF2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SULF2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Sulf-2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SULF2 pour l'étude de la signalisation de Sulf-2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SULF2 essentiels à la fonction de Sulf-2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SULF2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Sulf-2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Sulf-2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SULF2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Sulf-2 plasmide HDR (h) et le Sulf-2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SULF2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SULF2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.