Su[fu] CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423973

Übersicht

Suppressor of fused (Sufu) codiert das Su(fu)-Protein, einen zentralen negativen Regulator der Hedgehog-Signalübertragung, der die Aktivität von GLI-Transkriptionsfaktoren hemmt und zur Kontrolle von Transkriptionsprogrammen beiträgt, die embryonale Musterbildung, Zellschicksalsfestlegung und Gewebehomöostase steuern. In Mauszellen fungiert SUFU als zytoplasmatisches Gerüstprotein, das GLI-Proteine sequestriert und deren Prozessierung sowie den Zugang zum Zellkern koordiniert, eingebettet in die vom primären Zilium abhängige Dynamik des Hedgehog-Signalwegs. Störungen von Sufu können den Signalweg-Output und die nachgeschaltete Genexpression verschieben, was es für die Untersuchung der Logik entwicklungsbiologischer Signalgebung und Hedgehog-getriebener zellulärer Phänotypen relevant macht. Eine veränderte SUFU-Funktion wurde in krankheitsbezogenen Modellen mit dysregulierter Hedgehog-Signalübertragung in Verbindung gebracht, was seine Eignung als mechanistischer Knotenpunkt zur Analyse des Signalwegs unterstreicht.

Das Su[fu] CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Sufu-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Sufu-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Sufu nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Su[fu]-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Sufu-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Su[fu]-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Sufu-Exone abzielen, die für die Su[fu]-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Sufu-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Su[fu] CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Su[fu] CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Sufu-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Su[fu] HDR-Plasmid (m) und Su[fu] HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Sufu-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Sufu-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.