SUCLA2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423214

Descripción general

Sucla2 codifica la subunidad beta murina SUCLA2 de la succinil‑CoA sintetasa (formadora de ADP), una enzima de la matriz mitocondrial que cataliza la conversión reversible de succinil‑CoA en succinato con generación de ATP en el ciclo del ácido tricarboxílico (TCA). A través de esta reacción, SUCLA2 sostiene el metabolismo oxidativo, el flujo anaplerótico y la coordinación entre el ciclo TCA y el uso del succinil‑CoA relacionado con el hemo y los cuerpos cetónicos. La función de SUCLA2 está estrechamente vinculada a la homeostasis energética mitocondrial y al equilibrio de nucleótidos, y la alteración de esta vía se asocia con fenotipos de encefalomiopatía mitocondrial y defectos en el mantenimiento del ADNmt descritos en trastornos mitocondriales relacionados con SUCLA2. Por ello, en modelos murinos Sucla2 es relevante para estudiar respuestas al estrés metabólico, vulnerabilidad neuromuscular y mecanismos que conectan enzimas del ciclo TCA con la estabilidad del genoma mitocondrial.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO SUCLA2 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Sucla2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Sucla2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Sucla2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína SUCLA2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Sucla2 para la investigación de la señalización de SUCLA2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Sucla2 críticos para la función de SUCLA2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Sucla2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido SUCLA2 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido SUCLA2 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Sucla2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR SUCLA2 (m) y el plásmido HDR SUCLA2 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Sucla2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Sucla2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.