SUCLA2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423214

Visão geral

Sucla2 codifica, no camundongo, a subunidade beta SUCLA2 da succinil-CoA sintetase (formadora de ADP), uma enzima da matriz mitocondrial que catalisa a conversão reversível de succinil-CoA em succinato com geração de ATP no ciclo do ácido tricarboxílico (TCA). Por meio dessa reação, a SUCLA2 sustenta o metabolismo oxidativo, o fluxo anaplerótico e a coordenação entre o ciclo do TCA e o uso de succinil-CoA relacionado ao heme e aos corpos cetônicos. A função da SUCLA2 está intimamente ligada à homeostase energética mitocondrial e ao equilíbrio de nucleotídeos, e a perturbação dessa via está associada a fenótipos de encefalomiopatia mitocondrial e a defeitos na manutenção do mtDNA descritos em distúrbios mitocondriais relacionados à SUCLA2. Em modelos murinos, Sucla2 é, portanto, relevante para estudar respostas ao estresse metabólico, vulnerabilidade neuromuscular e mecanismos que conectam enzimas do ciclo do TCA à estabilidade do genoma mitocondrial.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO SUCLA2 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Sucla2 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Sucla2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Sucla2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína SUCLA2.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Sucla2 para a investigação da sinalização de SUCLA2, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Sucla2 críticos para a função SUCLA2
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Sucla2 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo SUCLA2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo SUCLA2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Sucla2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo SUCLA2 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR SUCLA2 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Sucla2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Sucla2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.