Stra6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405364

Übersicht

STRA6 kodiert Stra6, einen multipassigen Membranrezeptor, der die zelluläre Aufnahme von Vitamin A vermittelt, indem er an der Zelloberfläche Retinol–Retinol-bindendes Protein (RBP)-Komplexe bindet. Durch die Steuerung der intrazellulären Retinoidverfügbarkeit beeinflusst Stra6 die Retinsäure-Signalübertragung sowie nachgeschaltete transkriptionelle Programme, die Differenzierung, epitheliale Homöostase und die Musterbildung während der Entwicklung regulieren. Die STRA6-Aktivität greift in Retinoid-Stoffwechselnetzwerke ein, an denen u. a. LRAT, RDH/ALDH-Enzyme und nukleäre Retinsäure-Rezeptoren beteiligt sind, und prägt dadurch Entscheidungen über Zellschicksal und Gewebeintegrität. Eine Fehlregulation oder genetische Variation in STRA6 wurde mit Entwicklungsanomalien und sehbezogenen Phänotypen in Verbindung gebracht, was mit gestörtem Retinoidtransport und gestörter Signalgebung vereinbar ist.

Das Stra6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des STRA6-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des STRA6-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von STRA6 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Stra6-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von STRA6-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Stra6-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf STRA6-Exone abzielen, die für die Stra6-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere STRA6-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Stra6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Stra6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des STRA6-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Stra6 HDR-Plasmid (h) und Stra6 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von STRA6-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten STRA6-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.