Plásmido CRISPR de Activación (h) STOX1: sc-407515-ACT

STOX1 (storkhead box 1) codifica un factor de transcripción de tipo hélice-alada que se une al ADN y modula programas génicos que controlan decisiones de destino celular, la diferenciación y la transcripción sensible al estrés. En tejidos humanos, STOX1 se ha implicado en la regulación de la función del trofoblasto y el desarrollo placentario, con vínculos descritos con redes transcripcionales alteradas que participan en la invasión, el manejo del estrés oxidativo y la señalización inflamatoria. La expresión desregulada de STOX1 se ha asociado con trastornos relacionados con el embarazo, incluida la preeclampsia, y también se estudia por posibles funciones en vías del neurodesarrollo y la neurodegeneración a través de sus efectos sobre la expresión génica neuronal. Como regulador transcripcional, STOX1 ofrece un punto de entrada útil para diseccionar los circuitos reguladores aguas arriba y los genes diana aguas abajo en distintos modelos celulares.

STOX1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de STOX1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

STOX1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus STOX1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional STOX1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de STOX1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo STOX1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de STOX1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía STOX1 en células tumorales con expresión de STOX1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.