Plásmido CRISPR de Activación (h) Stim2: sc-403491-ACT

STIM2 (molécula de interacción estromal 2) codifica un sensor de Ca²⁺ del retículo endoplásmico que acopla el agotamiento de las reservas luminales de calcio a la entrada de calcio operada por depósitos (SOCE) mediante la activación de los canales ORAI en las uniones entre el RE y la membrana plasmática. Al moldear las señales de calcio citosólico, STIM2 influye en el acoplamiento excitación–transcripción, la señalización sináptica e inmunitaria y los programas de transcripción dependientes de calcio, incluidos NFAT y otras vías sensibles al estrés. En humanos, STIM2 se ha asociado con alteraciones de la homeostasis del calcio en contextos neurodegenerativos y neuropsiquiátricos, y también se estudia en relación con la activación de células inmunitarias y la regulación metabólica. Sus propiedades de detección basal en comparación con STIM1 lo convierten en un nodo útil para analizar los puntos de ajuste y la dinámica de la señalización del calcio en modelos fisiológicos y relevantes para enfermedad.

Stim2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de STIM2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Stim2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus STIM2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional STIM2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Stim2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo STIM2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Stim2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Stim2 en células tumorales con expresión de STIM2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.