Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Stim1 Double Nickase Plasmid (h): sc-401311-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Stim1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Stim1 Double-Nickase-Plasmid (h) und Stim1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf STIM1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Stim1: sc-166840
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Stim1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-401311-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Stim1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401311-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
STIM1 (stromal interaction molecule 1) ist ein im ER lokaliserter Ca2+-Sensor, der die Entleerung der luminalen Calciumspeicher mit der Aktivierung des store-operated calcium entry (SOCE) koppelt, indem er an ER–Plasmamembran-Kontaktstellen ORAI-Kanäle rekrutiert. Über die Regulation der zytosolischen Ca2+-Dynamik koordiniert Stim1 nachgeschaltete Signalwege, darunter calcineurin–NFAT-Transkriptionsprogramme, Zytoskelett-Remodelling sowie die calciumabhängige Kontrolle von Proliferation und Sekretion. STIM1-abhängiger SOCE ist zentral für die Aktivierung von Immunzellen und allgemeinere Stressantwort-Signalgebung, und eine veränderte STIM1-Funktion oder -Expression wurde mit immunologischen Funktionsstörungen, Myopathien und tumorassoziierten Calcium-Signalphänotypen in Verbindung gebracht. Diese Eigenschaften machen STIM1 zu einem häufig genutzten Knotenpunkt für die Analyse von Calcium-Signalnetzwerken und stimulusgekoppelten Transkriptionsantworten in humanen Zellmodellen.
Stim1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des STIM1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von STIM1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die STIM1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit STIM1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.