Plásmido CRISPR de Activación (h) Stim1: sc-401311-ACT

STIM1 codifica la molécula de interacción estromal 1 (Stim1), un sensor de Ca2+ del retículo endoplásmico que inicia la entrada de calcio operada por depósitos (SOCE) al acoplar el agotamiento de calcio del RE con la activación de los canales ORAI en sitios de contacto entre el RE y la membrana plasmática. Este eje de señalización del calcio coordina oscilaciones de Ca2+ citosólico que regulan programas transcripcionales, la remodelación del citoesqueleto, la secreción y la progresión del ciclo celular a través de vías que incluyen la señalización de calcineurina–NFAT y MAPK. La SOCE dependiente de STIM1 es un determinante central de la activación de células inmunitarias y de una homeostasis más amplia del calcio en numerosos tejidos. La actividad desregulada de STIM1 y la dinámica del influjo de Ca2+ se han asociado con alteraciones de la señalización inflamatoria, la función neuromuscular y fenotipos relevantes para el cáncer como la migración y la adaptación metabólica, lo que respalda su uso como nodo mecanístico en el modelado de enfermedades.

Stim1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de STIM1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Stim1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus STIM1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional STIM1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Stim1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo STIM1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Stim1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Stim1 en células tumorales con expresión de STIM1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.