Plasmide CRISPR/Cas9 KO STI1 (m): sc-423190

Présentation

Stip1 code la phosphoprotéine 1 induite par le stress (STI1, également appelée HOP), un co‑chaperon qui fait le lien entre HSP70 et HSP90 afin de coordonner le repliement, la maturation et la stabilisation des protéines de signalisation. Dans les cellules murines, STI1 soutient la protéostasie et contribue aux réponses cellulaires au choc thermique, au stress oxydatif et à d’autres agressions protéotoxiques, en influençant le contrôle qualité des protéines et leur renouvellement. En modulant la prise en charge des protéines clientes par les chaperons, STI1 peut façonner des voies régissant la signalisation des récepteurs et des kinases, la fonction mitochondriale et la dynamique du cytosquelette. Des réseaux de chaperons dérégulés impliquant STI1 sont pertinents dans des modèles de neurodégénérescence, de biologie du cancer et de réponses inflammatoires au stress, où l’altération de la stabilité du protéome et de la signalisation du stress constitue un trait commun.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO STI1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Stip1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Stip1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Stip1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine STI1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Stip1 pour l'étude de la signalisation de STI1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Stip1 essentiels à la fonction de STI1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Stip1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le STI1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le STI1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Stip1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le STI1 plasmide HDR (m) et le STI1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Stip1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Stip1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.