Plasmide CRISPR/Cas9 KO stefin A2 (m): sc-423187

Présentation

Stfa2 code la protéine murine de la famille des cystatines, la stéfine A2, un inhibiteur cytosolique des protéases cystéine de type papaïne, telles que les cathepsines. En limitant l’activité protéolytique, la stéfine A2 contribue à la régulation de la protéolyse intracellulaire, du renouvellement des protéines dans les lysosomes et les compartiments endolysosomaux, et à la protection contre les dommages médiés par les protéases lors du stress et de l’inflammation. Un déséquilibre entre les protéases cystéine et leurs inhibiteurs est pertinent pour des voies qui contrôlent la présentation antigénique, le maintien de la barrière épithéliale et le remodelage tissulaire. Une dérégulation de cet axe protéase–inhibiteur a été associée à des phénotypes inflammatoires et à des processus liés au cancer, dans lesquels l’activité des cathepsines influence l’invasion et le remodelage du microenvironnement.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO stefin A2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Stfa2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Stfa2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Stfa2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine stefin A2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Stfa2 pour l'étude de la signalisation de stefin A2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Stfa2 essentiels à la fonction de stefin A2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Stfa2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le stefin A2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le stefin A2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Stfa2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le stefin A2 plasmide HDR (m) et le stefin A2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Stfa2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Stfa2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.