Plasmide CRISPR/Cas9 KO STAU1 (m): sc-423181

Présentation

Le gène murin *Stau1* code STAU1, une protéine de liaison à l’ARN double brin qui médie la dégradation des ARNm dépendante de Staufen et régule la localisation, la stabilité et la traduction des ARNm. STAU1 participe au contrôle post-transcriptionnel de l’expression génique via l’assemblage de complexes ribonucléoprotéiques, en couplant la surveillance de l’ARN à des processus tels que la dynamique des granules de stress et le transport le long du cytosquelette. Dans les cellules de mammifères, une activité altérée de STAU1 a été associée à une dérégulation du métabolisme de l’ARN affectant la fonction neuronale et l’homéostasie musculaire, ce qui la rend pertinente pour l’étude de la neurodégénérescence et des phénotypes neuromusculaires. En tant que nœud des réseaux de régulation de l’ARN, STAU1 constitue un point d’entrée accessible pour analyser comment les choix de destinée des ARNm façonnent l’état cellulaire et la production du protéome.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO STAU1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Stau1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Stau1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Stau1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine STAU1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Stau1 pour l'étude de la signalisation de STAU1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Stau1 essentiels à la fonction de STAU1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Stau1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le STAU1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le STAU1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Stau1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le STAU1 plasmide HDR (m) et le STAU1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Stau1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Stau1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.